INSTRUKTIONER

om användningen av ett reagenssats för kolorimetrisk bestämning av protein i urin och cerebrospinalvätska med pyrogallolrött

Satsen innehåller:

200 ml (2 x 100 ml P + 2 x 2 ml kalibrator)

500 ml (2 x 250 ml P + 2 x 5 ml kalibrator)

Metodsprincipen

När protein interagerar med pyrogallol rött och

natriummolybdat bildar ett färgat komplex,

vars färgintensitet är proportionell mot koncentrationen

Kit innehåll

Reagens (P) - pyrogallol röd lösning i succinat

buffert redo för användning.

Kalibratorer - Lågkalibreringsproteinlösningar (0,20

g / l, används för att bestämma mikroproteinuri) och hög

(0,50 g / 1, använd för att bestämma proteinuri)

proteinkoncentration innehållande 70% albumin och 30%

globulin redo att användas.

Förvaringsuppsättning - vid en temperatur av 2-8 ° C i en förpackning

tillverkare för hela hållbarheten.

Stabilitet hos reagens och kalibratorer

Efter öppnandet är reagenset stabilt i 6 månader, kalibratorer - 3 månader. vid förvaring i tätt sluten form vid en temperatur på 2-8 ° C på en mörk plats.

Normala värden

• urin - upp till 0,120 g / l (upp till 0,141 g / dag);
• cerebrospinalvätska (CSF) - 0,150-0,450 g / 1.

Prov för analys

Urin, icke hemolyserad CSF.

Förberedelse för analys

1. CSF och urin centrifugerades i 10 minuter vid 2700-4000 rpm.
2. Använd rena, välvättade rör för analys. Testet för provrörens lämplighet för analys är avsaknaden av färgförändring i reagenset. Om reagenset blir blått utan att tillsätta ett prov, kommer resultaten av proteinbestämning att överskattas; Avlägsna sedan reagenset först och tillsätt sedan urin.
3. Vid upprättandet av metoden bör nya kyvetter användas, eftersom de inte färgas med reagenset och reaktionsprovet. Gamla plastkuvetter (grumliga, inte transparenta) är inte lämpliga för mätning. Innan du använder, behandla kyvetterna som användes enligt följande: lämna i tvättlösningen (200 ml 5% väteperoxidlösning eller 1 ml tvättmedel), skölj sedan med tapp och destillerat vatten minst 10 gånger. Satsen är lämplig för analys av biokemiska halvautomatiska och automatiska analysatorer.

Analys våglängd: 598 (578-620) nm; Optisk bana längd: 10 mm; temperatur: 18-25 ° C

Reagens och kalibrator bör hållas vid rumstemperatur i ca 30 minuter före analys.

Förfarande 1 (bestämning av proteinuri)

Prov att blanda, håll i 10 minuter vid rumstemperatur (18-25 ° C). Mät den optiska densiteten hos experimentella (E) och kalibrerings (EC) prover mot kontrollprovet (blank). Färgen är stabil i 1 timme.

VAD ÅTGÄRDER VI I URINSULFOSALYCYLMETODEN?

I vårt land används en turbidimetrisk metod med en sulfosalicylsyra (sulfosalicylmetod), som föreslagits av Kingsbury F, för att bestämma proteinkoncentrationen i urinen. B. och medförfattare 1926. Samtidigt använder laboratorierna i de utvecklade länderna inte praktiskt taget denna metod, vilket resulterar i att laboratoriekontroll av kvaliteten på urinproteinanalysen visar en minskning av variationskoefficienten. Så 1993 utförde 60% av franska kliniska diagnostiska laboratorier bestämningen av urinproteinkoncentrationen med hjälp av en kolorimetrisk metod med pyrogallol-rödfärg (pyrogallolmetod) och endast 10% med sulfosalicylmetoden. Diagnostiska kit för bestämning av urinprotein baserat på pyrogallolmetoden framställs av sådana kända företag som Bayer D iagnostics, Beckman, Biodirect, Biocon Diagnostik, Bio-Rad Laboratories, Eurodiag, Kone, Merck, Randox, Serono, Sentinel CH, Sigma. Tyvärr, i vårt land, av ekonomiska skäl och delvis på grund av bristande erfarenhet, används fortfarande färgmätningsmetoder för att bestämma urinprotein väldigt lite.

Frågan uppstår - hur motiverat är laboratoriernas vägran i industriländerna att använda den enkla och, allra viktigaste, billiga metoden. För att klargöra denna fråga jämförde vi resultaten av bestämning av proteinkoncentrationen i patientens urin genom två metoder: sulfosalicylsyra [1] och pyrogallol [2].

Förfarandet för att mäta koncentrationen av protein med varje metod var som följer.

Reagens: 3% sulfosalicylsyralösning, 0,9% natriumkloridlösning,

Kalibrator (kalibreringslösning av serumalbumin, 50 g / l i natriumkloridlösning, 0,9% och natriumazid, 0,095%) från "Uni-Test - Total Protein" -satsen tillverkad av "Diakon DS" Om Unimed ".

Utrustning: spektrofotometer SF-2000 producerad av OKB "Spectr".

Mätkurs: 0,5 ml filtrerad urin och 1,5 ml av en 3% sulfosalicylsyra-lösning sattes till en kvartskyvett med en optisk banlängd av 1 cm och omrördes. Efter 10 min mättes den optiska densiteten på en spektrofotometer vid en våglängd av 595 nm mot ett blankt prov (kyvett med 0,5 ml urin och 1,5 ml 0,9% natriumkloridlösning). Beräkningen av proteinkoncentrationen utfördes enligt kalibreringsschemat. För sin konstruktion utspädningar av en standardlösning av humant serumalbumin i 0,9% natriumkloridlösning med koncentrationer av: 0,025; 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 g / 1. För var och en av de beredda lösningarna utfördes mätningen på samma sätt som med ett urinprov. Kalibreringsgrafen visas i Fig. 1.

Fig. 1. Kalibreringskurva för bestämning av protein i urinen med sulfosalicylmetod.

Ett kommersiellt kit tillverkat av Biocon Diagnostik (Tyskland) - Flätest USP - Protein, en ultrakänslig metod baserad på det röda pyrogallol-molybdatkomplexet användes.

Reagens: pyrogallolrött, 0,06 mmol / 1, natriummolybdat, 0,04 mmol / 1, succinatbuffert 50 mmol / l, pH 2,5, detergenter 2%; Kalibrator (kalibreringslösning av serumalbumin, 50 g / l i natriumkloridlösning, 0,9% och natriumazid, 0,095%) från "Uni-Test - Total Protein" -satsen tillverkad av "Diakon DS" Om Unimed ". [3].

Utrustning: biokemisk fotometer StatFax 1904 Plus ("Awareness Technology inc.", USA).

Kalibreringskurvan för den beskrivna metoden med förhållandet prov / reagens - 1 / 12,5 erhölls med användning av speciellt framställda lösningar av serumalbumin: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0 g / l genom utspädning av kalibratorn (50 g / 1) med 0,9% natriumkloridlösning, (Fig.2).

Fig. 2. Kalibreringskurva för pyrogallol-röd metod, Flutest USP-reagens, Biocon Diagnostik (Tyskland) med ett prov / reagensförhållande på 1 / 12,5.

80 pl togs från varje proteinlösning och blandades med 1,0 ml reagens; mätt som urinprover.

Fig. 3. Ett diagram över jämförbarheten av resultaten av mätning av proteininnehållet i urinprover med sulfosalicyl- och pyrogallolmetoder.

Kalibreringskurvan för reagenset framställd av Unimed A / O och Biocon Diagnostik, med ett prov / reagensförhållande på 1/30, erhölls med användning av speciellt framställda lösningar av serumalbumin: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0, 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,75; 1,8; 1,85; 1,9; 2,0 g / l genom utspädning av kalibratorn (50 g / l) med 0,9% natriumkloridlösning (fig 4).

Fig. 4. Kalibreringskurvor för Unimed A / O-reagenset (övre grafen) och Flätest USP-kit från Biocon Diagnostik (nedre grafen) med ett prov / reagensförhållande på 1/30.

50 pl togs från varje proteinlösning och blandades med 1,5 ml reagens och mättes som urinprover.

I studien användes den modifierade högkänsliga varianten för att uppnå maximal känslighet för pyrogallolmetoden. För detta har volymen av tillsatt urin ökat. Mätkurs: 1 ml av huvudreagenset tillsattes till alla rör, sedan tillsattes 80 | il destillerat vatten (ämne) till det första röret, 80 | il centrifugerad urin tillsattes till de återstående rören, inkuberades vid rumstemperatur i 10 minuter och den optiska densiteten hos provet mättes mot ämnet 600 nm våglängd och 650 nm differentialfilter

För att jämföra metoderna för bestämning av koncentrationen av protein i urinen mättes 60 urinprover av patienter med sulfosalicyl- och pyrogallolmetoder.

Känsligheten för metoder för att mäta protein i urinen bedömdes genom att undersöka beredda vattenlösningar av urin innehållande låga koncentrationer av serumalbumin (från 0 till 0,05 g / l). För pyrogallol- och sulfosalicylmetoder undersökte vi även värdena för icke-specifik absorption på grund av färgen på urinprovet. För detta uppmättes den optiska densiteten hos urinprover, i vilka i stället för sulfosalicylsyra eller pyrogallolreagens tillsattes en ekvivalent mängd saltlösning.

För att utvärdera effekten av matrisen (urin) på resultaten av sulfosalicylmetoden utfördes följande experiment.

1) I urinprover som inte innehöll protein, enligt pyrogallol- och sulfosalicylmetoderna (n = 43) tillsattes humant serumalbumin vid en slutlig koncentration av 0,4 g / 1. Sedan bestämdes med användning av ovanstående metoder proteinkoncentrationen i de beredda proven.

2) Urinprover (n = 16), som hade ett protein enligt pyrogallolmetoden, utspäddes två gånger med en 0,9% natriumkloridlösning. De erhållna proverna undersöktes igen med sulfosalicylmetoden, proteinkoncentrationen omberäknades för utspädning.

Forskningsresultat och diskussion

En studie av urinprover innehållande specifika albuminkoncentrationer visade att den minsta detekterbara albuminkoncentrationen (metodkänslighet) var 0,033 g / l för sulfosalicylmetoden och 0,012 g / l för pyrogallolmetoden.

Resultaten av mätningar i form av ett diagram över jämförbarhet av resultaten av mätning av proteininnehållet i urinprover genom sulfosalicylsyra (ordinataxel) och pyrogallol (abscissaaxel) -metoder visas i figur 3. Den solida snedställningen på grafen motsvarar mätresultatets jämlikhet med två metoder. Om båda metoderna gav liknande värden, måste punkterna i diagrammet grupperas nära den fasta linjen. Data som visas i fig. 3, kan vi också notera att sulfosalicylmetoden konsekvent visade lägre proteinkoncentrationer i alla urinprover jämfört med pyrogallolmetoden.

Såsom studien visade, mellan resultaten erhållna med användning av sulfosalicyl- och pyrogallolmetoder finns det ingen övertygande statistisk koppling. Dessutom, jämfört med pyrogallolmetoden, visade sulfosalicylmetoden i 95% urinprover lägre värden av proteinkoncentration. Samtidigt gav i 86% av fallen mätningen genom sulfosalicylmetoden underskattade resultat med två eller flera gånger jämfört med pyrogallolmetoden.

Samtidigt visade sulfosalicylmetoden i vissa fall närvaron av protein i provet på grund av den mörka färgen eller ökad grumlighet hos den studerade urinen. Det fastställdes att vid framställning av proteinet genom sulfosalicylmetoden (prov / reagensförhållande = 1/3) vid en våglängd av 595 nm kan urinprovets bidrag på grund av dess färg eller turbiditet till resultatet vara från 0 till 0,247 g / l (medelvärde - 0,031 g / 1). Det bör således inses att vid användning av sulfosalicylmetoden är användning av ett kontrollprov (urinprov + saltlösning) för varje urinprov obligatoriskt. Vid bestämning av proteinet med pyrogallolmetoden påverkades inte färgen eller graden av urinprovets grumlighet.

Experiment vid bedömningen av effekten av matrisen (urin) visade att i nästan alla beredda urinprover innehållande 0,4 g / 1 albumin var dess koncentration, bestämd med sulfosalicylmetoden, under 0,4 g / l i genomsnitt 20% (gränsvärden proteinkoncentration 0,29-0,34 g / 1). Samtidigt, när mätningen av proteinkoncentrationen i dessa prover med pyrogallolmetoden var resultaten för alla prover inom området 0,40-0,46 g / 1. Vid bedömning av effekten av matrisen (urin) på resultaten av mätning av proteinkoncentrationen med sulfosalicylmetoden visade sig också att i 5 av 16 dubbelutspädda urinprover var proteinkoncentrationen 15-33% högre än i motsvarande icke utspädda prover. För den slutliga belysningen av effekten av matrisen på resultaten av sulfosalicylmetoden krävs forskning på ett stort antal urinprover.

Sålunda indikerar de erhållna data fördelarna med pyrogallolmetoden över sulfosalicylmetoden på grund av dess högre känslighet och icke-mottaglighet för störande faktorer, inget behov av ett blind urinprov, möjligheten att använda en standard för att konstruera en kalibreringskurva och en liten mängd urin för analys. Närvaron av sådana egenskaper gör att vi kan rekommendera pyrogallolmetoden för utbredd användning i laboratoriepraxis.

Från de erhållna data följer en slutsats: resultaten av mätning av koncentrationen av protein i urinen medelst sulfosalicylmetoden är oföränderliga med resultaten erhållna med pyrogallolmetoden. Detta faktum är svaret på frågan - varför de utvecklade ländernas laboratorier inte använder sulfosalicylmetoden. Tillämpningen av denna metod i underutvecklade länder förklaras tydligen av det faktum att prisfaktorn råder över noggrannheten och diagnostisk betydelse av de erhållna resultaten och, med tanke på de figurer som presenteras i fig. 3 resultat, det kan sägas, och över sunt förnuft. Vem behöver en sådan analys, när det vid en proteinkoncentration i urinen på 0,3 g / l kan mätresultatet vara från 0,05 till 0,25 g / l? När det gäller prisfaktorn betalar miseraren två gånger, som du vet. Felaktiga resultat av analysen leder till en felaktig diagnos och ineffektiv behandling av patienten. Den största risken att använda sulfosalicylmetoden är att vi får signifikant underskattade värden och inte sällan saknar proteinuri. Därför kan denna metod inte tillämpas ens för screening.

Så vad mäter vi med sulfosalicylmetoden? Metoden tillhör klassen turbidimetrisk, baserad på mätning av förändringen i ljusöverföring (D D) av reaktionsblandningen på grund av ljusspridning (grumlighet). Vid detektering av protein i urinen bildas grumlighet på grund av följande process: molekyler av urinproteiner i ett surt medium denatureras, från en kompakt globform till en lös "trådformig" form. Samtidigt ökar förmågan hos konglomeratbildningen kraftigt (fällningsreaktion) i proteiner. Individuella proteinmolekyler är mindre än våglängden av synligt ljus och därför sprider det väldigt svagt. Spridningseffektiviteten ökar dramatiskt när storleken av de resulterande konglomeraten av proteinmolekyler närmar sig värdet på 0,6 jim (våglängden hos probljuset). Ju större koncentrationen av protein i urinen är, desto större är antalet sådana konglomerat (spridningscentra) bildade. Relationen mellan den optiska densiteten D D mätt på en fotometer och koncentrationen av protein i urinen är emellertid mycket komplex. Vid reaktionens första steg bildas en viss mängd små proteinpartiklar, sedan börjar de klibbas i större partiklar, medan koncentrationen av spridda centra minskar och effektiviteten (tvärsnitt) av spridningen av varje centrum ökar. Vid varje given tillfälle har vi i reaktionsblandningen ett visst antal spridningscentraler med olika storlekar. Vid höga koncentrationer av protein i urinen kan bilda stora proteinpartiklar som fäller ut, vilket leder till en minskning av den optiska densiteten hos reaktionsblandningen.

Processen med denaturering av proteiner och reaktionen av utfällning beror på kompositionen för mediet i vilket de förekommer (pH, koncentration av olika salter). För att kalibrera metoden använder vi en vattenhaltig lösning av humant albumin med tillsats av 0,9% natriumklorid. När vi mäter koncentrationen av protein i urinen, vet vi inte och tar inte hänsyn till antingen urinets pH eller dess saltkomposition. Vi tar inte heller hänsyn till det faktum att olika proteiner reagerar annorlunda i sulfosalicylsyralösningen. Detta förklarar den stora spridningen av mätresultaten som presenteras i fig. 3. Ju närmare sammansättningen av urin till kalibratorns sammansättning desto mer exakt är mätresultatet. Det finns dock väldigt få sådana urinprover. I de flesta fall är urinsammansättningen sådan att mätresultaten är underskattade och ofta ganska signifikanta.

Den senare bekräftas av experimentet beskrivet ovan, i vilket proteinkoncentrationen uppmättes med sulfosalicylmetoden i outspädda och dubbelutspädda urinprover. Jämförelse av de erhållna uppgifterna visade att utspädning av urin (med hänsyn tagen till utspädningsgraden) leder till en ökning av resultaten av mätningar av proteinkoncentrationen med 15-33%. Detta faktum bekräftar det betydande inflytandet av urinsammensättningen på resultatet av bestämning av koncentrationen av protein (matriseffekt).

Varför pyrogallol metod möjliggör för att få mer exakta resultat av mätning av koncentrationen av protein i urinen? För det första på grund av den större multipliciteten av utspädning av urinprover i reaktionsblandningen. Om det i sulfosalicylmetoden är urinprov / reagensförhållandet 1/3, då kan pyrogallolmetoden ligga i intervallet 1 / 12,5 till 1/60, beroende på varianten av tekniken, vilket signifikant minskar effekten av urinkompositionen på mätresultatet. För det andra fortsätter reaktionen i succinatbuffert, det vill säga vid ett stabilt pH. Slutligen är själva principen om metoden, om det kan sägas så, mer transparent. Natriummolybdat och pyrogallol rött färgämne bildar ett komplex med en proteinmolekyl. Detta leder till det faktum att färgämnesmolekylerna, i ett fritt tillstånd, inte absorberar ljus vid en våglängd på 600 nm, i kombination med ett protein, absorberar ljus. Således verkar vi markera varje proteinmolekyl med ett färgämne och som ett resultat finner vi att förändringen i den optiska densiteten hos reaktionsblandningen vid en våglängd av 600 nm är unikt relaterad till proteinkoncentrationen i urinen.

Som en slutsats presenteras de mest signifikanta skillnaderna mellan sulfosalicylmetoden för bestämning av proteinet i urinen och metoden med användning av pyrogallolrött färgämne i tabell nr 1.

Tab. Nr. 1. Jämförande egenskaper hos två metoder för bestämning av protein i urinen (sulfosalicyl- och pyrogallolmetoder)

Bestämning av urinprotein med pyrogallolrött

Metodsprincipen baseras på fotometrisk mätning av den optiska densiteten hos en lösning av ett färgat komplex bildat genom interaktionen mellan proteinmolekyler med molekyler i det pyrogallol-röda färgämneskomplexet och natriummolybdat (Pyrogallol Red-Molybdate-komplex) i ett surt medium. Färgens intensitet i lösningen är proportionell mot proteininnehållet i det material som studeras. Närvaron av detergenter i reagenset ger en ekvivalent definition av proteiner av olika natur och struktur.

Reagens. 1) 1,5 mmol / 1 lösning av pyrogallolrött (PGA): 60 mg PGA löses i 100 ml metanol. Förvaras vid temperatur 0-5 ° С; 2) 50 mmol / 1 succinatbuffertlösning pH 2,5: 5,9 g bärnstenssyra (HOOC-CH₂CH₂-COOH); 0,14 g natriumoxalat (Na₂C₂O₄) och 0,5 g natriumbensoat (C₆H₅COONa) löses i 900 ml destillerat vatten; 3) 10 mmol / 1 lösning av natriummolybdatkristallhydrat (Na₂MoO₄ × 2H₂O): 240 mg natriummolybdat löses i 100 ml destillerat vatten; 4) Arbetsreagens: Till 900 ml succinatbuffertlösning tillsätt 40 ml av lösningen av PHC och 4 ml natriummolybdatlösning. Lösningens pH justeras till 2,5 med en 0,1 mol / l lösning av saltsyra (HCl) och dess volym justeras till 1 liter. Reagenset i denna form är färdigt att använda och är stabilt vid förvaring på en mörk plats och vid en temperatur av 2-25 ° C i 6 månader; 5) 0,5 g / 1 standard albuminlösning.

Förloppsförloppet. 0,05 ml av den studerade urinen introduceras i det första provröret, 0,05 ml standardlösning av albumin tillsätts till det andra provröret och 0,05 ml destillerat vatten till det tredje provröret (kontrollprov), därefter tillsättes 3 ml arbetsreagens till dessa provrör. Innehållet i rören blandas och efter 10 minuter fotometeras provet och standarden mot ett kontrollprov vid en våglängd av 596 nm i en kyvett med en optisk banlängd av 10 mm.

Beräkningen av proteinkoncentrationen i det analyserade urinprovet utförs enligt följande formel:

där C är proteinkoncentrationen i det analyserade urinprovet, g / 1; EN_etc. och a_artikel- utrotning av det studerade urinprovet och standardalbuminlösningen, g / l; 0,5 - koncentration av standard albuminlösning, g / l.

• Lösningens färg (färgkomplex) är stabil i en timme;
• direkt proportionell relation mellan koncentrationen av protein i provet och absorptionen av lösningen beror på typen av fotometer;
• När proteinhalten i urinen är över 3 g / l spädes provet med isotonisk natriumkloridlösning (9 g / l) och bestämningen upprepas. Graden av utspädning beaktas vid bestämning av proteinkoncentrationen.

Vi behandlar levern

Behandling, symtom, droger

Pyrogallol röd bestämning av protein i urinen

26.02.2009

Kurilyak O.A., Ph.D.

Normalt utsöndras proteinet i urinen i en relativt liten mängd, vanligen inte mer än 100-150 mg / dag.

Daglig diurese hos en frisk person är 1000-1500 ml / dag; Således är proteinkoncentrationen under fysiologiska betingelser 8-10 mg / dL (0,08-0,1 g / 1).

Total urinprotein representeras av tre huvudfraktioner - albumin, mukoproteiner och globuliner.

Urinalbumin är den del av serumalbumin som har filtrerats i glomeruli och har inte reabsorberats i renal tubulerna; vid normal utsöndring av albumin i urinen är mindre än 30 mg / dag. En annan viktig källa till protein i urinen är njurtubulerna, speciellt den distala delen av tubulerna. Dessa tubuler utsöndrar två tredjedelar av den totala mängden urinprotein; av denna mängd representeras cirka 50% av Tamm-Horsfall glykoproteinet, som utsöndras av distal tubulats epitel och spelar en viktig roll vid bildandet av urinstenar. Andra proteiner är närvarande i urinen i små mängder och kommer från plasmaproteiner med låg molekylvikt filtrerad genom njurfiltret, som inte reabsorberas i renal tubuler, mikroglobuliner från renal tubulats epitel (RTE), liksom prostatisk och vaginal urladdning.

Proteinuri, det vill säga en ökning av proteininnehållet i urinen är ett av de mest signifikanta symptomen, vilket återspeglar njurskador. Ett antal andra tillstånd kan dock också åtföljas av proteinuri. Därför finns det två huvudgrupper av proteinuri: renal (sann) och extrarenal (falsk) proteinuri.

Vid renal proteinuri kommer proteinet in i urinen direkt från blodet på grund av en ökning av permeabiliteten hos glomerulärfiltret. Renal proteinuria finns ofta i glomerulonefrit, nefros, pyelonefrit, nefroscleros, njureamyloidos, olika former av nefropati, till exempel nefropati av gravida kvinnor, feber, hypertoni etc. Proteinuri kan också hittas hos friska personer efter allvarlig fysisk ansträngning, hypotermi och psykisk stress. I nyfödda observeras fysiologisk proteinuri i de första veckorna av livet och när asteni uppträder hos barn och ungdomar är ortostatisk proteinuri (i kroppens upprättstående position) möjlig i kombination med snabb tillväxt mellan 7 och 18 år.

Vid felaktig (extrarenal) proteinuri är källan av protein i urinen en blandning av leukocyter, erytrocyter, epitelceller i urinvägarna i urinvägarna. Förfallet av dessa ämnen, särskilt uttalat med alkalisk urin, leder till ingreppet av protein i urinen, som redan har passerat njurfiltret. Särskilt hög grad av falsk proteinuri ger blod i urinen, med stor hematuri, den kan nå 30 g / l och mer. Sjukdomar som kan åtföljas av extrarenal proteinuria - urolithiasis, njure tuberkulos, njure eller urinvägar tumörer, cystit, pyelit, prostatit, uretrit, vulvovaginit.

Klinisk klassificering innehåller mild proteinuri (mindre än 0,5 g / dag.), Måttlig (från 0,5 till 4 g / dag.), Eller svår (mer än 4 g / dag.).

De flesta patienter med njursjukdom, såsom akut glomerulonefrit eller pyelonefrit, avslöjar måttlig proteinuri, men patienter med nefrotiskt syndrom utsöndrar vanligen mer än 4 g protein i urinen dagligen.

För den kvantitativa bestämningen av protein används ett brett spektrum av metoder, i synnerhet den enhetliga Brandberg-Roberts-Stolnikov-metoden, biuretmetoden, sulfosalicylsyrametoden, metoderna med användning av Coomassie-blåfärg, pyrogallol-rött färgämne etc.

Användningen av olika metoder för att bestämma protein i urinen har lett till en allvarlig förvirring vid tolkningen av gränserna för normen för proteininnehåll i urinen. Eftersom två metoder används mest i laboratorier - med sulfosalicylsyra och pyrogallol röd färg, anser vi problemet med att gränserna för normerna är korrekta för dem. Med utgångspunkt från sulfosalicylmetoden i normal urin bör proteinhalten inte överstiga 0,03 g / l, och ur pyrogallolsynpunkt, 0,1 g / l! Skillnaderna är tredubbla.

Låga värden på normal koncentration av proteiner i urinen vid användning av sulfosalicyl på grund av följande punkter:

• kalibreringskurvan baseras på en vattenhaltig lösning av albumin. Urin i dess sammansättning skiljer sig väldigt från vatten: pH, salt, föreningar med låg molekylvikt (kreatinin, karbamid, etc.). Som ett resultat, enligt Altshuler, Rakov och Tkachev, kan ett fel vid bestämning av urinprotein vara 3 gånger eller mer! dvs Korrekta resultat kan endast erhållas i fall där urinen har en mycket låg specifik gravitation och dess sammansättning och pH närmar sig vatten;
• Den högre känsligheten av sulfosalicylmetoden till albumin i jämförelse med andra proteiner (vid den tidpunkten som nämnts ovan är albumin i normala urinprover inte mer än 30% av det totala urinproteinet);
• Om urin-pH-skiftet förskjuts till den alkaliska sidan neutraliseras sulfosalicylsyra, vilket också medför en minskning av resultaten av proteinbestämning;
• sedimenteringshastigheten av fällningar är föremål för signifikant variation - vid låga proteinkoncentrationer sänks utfällningen och tidig uppsättning av reaktionen leder till en underskattning av resultatet;
• hastigheten för utfällningsreaktion beror huvudsakligen på blandningen av reaktionsblandningen. Vid höga koncentrationer av protein kan kraftig skakning av röret leda till bildandet av stora flingor och deras snabba utfällning.

Alla ovan angivna egenskaper hos metoden leder till en signifikant underskattning av proteinkoncentrationen bestämd i urinen. Graden av underreporting beror starkt på sammansättningen av ett visst urinprov. Eftersom metoden för sulfosalicylsyra ger ett underskattat värde av proteinkoncentration är den normala gränsen för denna metod också 0,03 g / l, ungefär tre gånger för låg i jämförelse med de data som ges i främmande referensböcker vid klinisk laboratoriediagnostik.

De allra flesta laboratorier i västländer har övergivit användningen av sulfosalicylmetoden för att bestämma koncentrationen av protein i urinen och aktivt använda pyrogallolmetoden för detta ändamål. Pyrogallolmetoden för bestämning av proteinkoncentrationen i urin och andra biologiska vätskor baseras på den fotometriska principen att mäta den optiska densiteten hos ett färgat komplex som bildas genom interaktionen mellan proteinmolekyler och pyrogallolrött färgämne och natriummolybdatkomplexmolekyler (Pyrogallol Red-Molybdate-komplex).

Varför pyrogallol metod möjliggör för att få mer exakta resultat av mätning av koncentrationen av protein i urinen? För det första på grund av den större multipliciteten av utspädning av urinprover i reaktionsblandningen. Om det i sulfosalicylmetoden är urinprov / reagensförhållandet 1/3, då kan pyrogallolmetoden ligga i intervallet 1 / 12,5 till 1/60, beroende på varianten av tekniken, vilket signifikant minskar effekten av urinkompositionen på mätresultatet. För det andra fortsätter reaktionen i succinatbuffert, det vill säga vid ett stabilt pH. Och slutligen kan själva principen i metoden sägas vara mer "transparent". Natriummolybdat och pyrogallol rött färgämne bildar ett komplex med en proteinmolekyl. Detta leder till det faktum att färgämnesmolekylerna i det fria tillståndet som inte absorberar ljus vid en våglängd av 600 nm i kombination med ett proteinabsorptionsljus. Således verkar vi markera varje proteinmolekyl med ett färgämne och som ett resultat ser vi att förändringen i den optiska densiteten hos reaktionsblandningen vid en våglängd av 600 nm klart hör ihop med proteinkoncentrationen i urinen. Eftersom näringen av pyrogallol rött till olika proteinfraktioner är nästan samma, medger metoden att bestämma det totala urinproteinet. Därför är gränsen för normala värden av proteinkoncentration i urinen 0,1 g / l (det anges i alla moderna västerländska riktlinjer för klinisk och laboratoriediagnostik, inklusive klinisk manual för laboratorietester, redigerad av N. Tits). Jämförande egenskaper hos pyrogallol och sulfosalicylmetoder för bestämning av urinprotein presenteras i Tabell 1.

Sammanfattningsvis vill jag återigen fokusera på att när laboratoriet går från sulfosalicylmetoden för att bestämma urinproteinet i pyrogallolmetoden ökar gränsvärdet för normala värden avsevärt (från 0,03 g / l till 0,1 g / l!). Denna laboratoriepersonal bör verkligen informera kliniker, eftersom I denna situation kan diagnosen proteinuria endast göras om proteinet i urinen överstiger 0,1 g / l.

3. Bestämning av protein.

Metodsprincipen baserad på koagulering av protein i urinen i närvaro av salpetersyra (eller 20% lösning av sulfosalicylsyra).

Arbete framsteg: till 5 droppar urin tillsätt 1-2 droppar salpetersyra (eller sulfosalicylsyra). I närvaro av protein i urinen framgår grumlighet.

Tabell. Detektion av patologiska komponenter i urinen.

Anmärkning: I närvaro av glukos och protein i den undersökta urinen bestäms deras kvantitativa innehåll.

Kvantitativ bestämning av protein i urinen genom den kolorimetriska metoden med pyrogallolrött.

Metodsprincipen: När protein interagerar med pyrogallolrött och natriummolybdat bildas ett färgat komplex, färgintensiteten, som är proportionell mot proteinkoncentrationen i provet.

reagens: Arbetsreagens - pyrogallol röd lösning i succinatbuffert, kalibreringsproteinlösning med en koncentration på 0,50 g / l

Proverna blandas, håll i 10 minuter. vid rumstemperatur (18-25 ° C). Mått upplevd optisk densitet (D_op) och kalibreringsprov (D_till) mot kontrollprovet vid A = 598 (578-610) nm. Färgning är stabil i 1 timme.

beräkning: koncentrationen av protein i urinen (C) g / l beräknas med formeln:

Normala värden: upp till 0,094 g / l, (0,141 g / dag)

Kvantitativ bestämning av glukos i urinen genom glukosoxidasmetoden.

Metodsprincipen: När D-glukos oxideras genom atmosfäriskt syre under verkan av glukosoxidas bildas en ekvimolär mängd väteperoxid. Under peroxidas verkan oxiderar väteperoxiden kromogena substrat (en blandning av fenol och 4 aminoantipirin - 4AAP) med bildandet av en färgad produkt. Färgens intensitet är proportionell mot glukosinnehållet.

2 N₂Oh₂ + fenol + 4AA-färgad förening + 4NV₂Oh

Arbete framsteg: 1 ml av arbetslösningen och 0,5 ml fosfatbuffert införs i två rör. 0,02 ml urin tillsätts till det första röret, och 0,02 ml av kalibratorn sättes till den andra (kalibrering, glukosstandardlösning, 10 mmol / 1). Proverna blandas, inkuberas i 15 minuter vid en temperatur av 37 ° C i en termostat och den optiska densiteten mäts genom experimentell (D_op) och kalibrering (D_till) prover mot arbetsreagenset vid en våglängd av 500-546 nm.

Innehållet av glukos i daglig urin bestäms av mmol / dag genom att multiplicera resultatet erhållet med den uppsamlade volymen per dag.

Obs. När sockerhalten i urinen över 1% måste spädas.

För närvarande använder biokemiska laboratorier en enhetlig uttrycklig metod för att analysera urin för glukos genom att använda reaktivt glukostestglukosprov eller använda kombinerade testremsor för pH, protein, glukos, ketonkroppar och blod. Testremsor, nedsänkt i ett kärl med urin i 1 sekund. och jämföra färgen på skalan.

Doktor Hepatit

leverbehandling

Norm protein i urin pyrogallol metod

En frisk person producerar 1,0-1,5 liter urin per dag. Ett innehåll av 8-10 mg / dl protein i det är ett fysiologiskt fenomen. Det dagliga intaget av protein i urinen 100-150 mg ska inte orsaka misstanke. Globulin, mukoprotein och albumin är det som sminkar totalt protein i urinen. Ett stort albuminutflöde indikerar ett brott mot filtreringsprocessen i njurarna och kallas proteinuri eller albuminuri.

Varje substans i urinen ges en "hälsosam" hastighet, och om proteinindexet fluktuerar kan detta indikera njurens patologi.

Urinalysis innebär användning av antingen den första (morgon) delen, eller ta ett dagligt prov. Det senare är att föredra för att bedöma proteinuriens nivå, eftersom proteininnehållet har uttalat dagliga fluktuationer. Urin under dagen samlas i en behållare, mäter den totala volymen. För ett laboratorium som genomför urinproteinanalys är ett standardprov (från 50 till 100 ml) från denna behållare tillräckligt, och resterande mängd är inte nödvändigt. För mer information utförs ett extra test på Zimnitsky, vilket visar om urinindikatorerna per dag är normala.

Tillbaka till innehållsförteckningen

Proteinet i urinen är normalt hos en vuxen bör inte överstiga 0,033 g / l. Samtidigt är dagsräntan inte högre än 0,05 g / l. För gravida kvinnor är proteinhastigheten i daglig urin mer - 0,3 g / l. Och på morgonen är urinen densamma - 0,033 g / l. Proteinstandarder skiljer sig åt i den allmänna analysen av urin och hos barn: 0,036 g / l för morgondelen och 0,06 g / l per dag. Oftast gör laboratorierna en analys med två metoder, som visar hur mycket proteinfraktion som ingår i urinen. Ovanstående normala värden är giltiga för analysen utförd med sulfosalicylsyra. Om pyrogallol rött färgämne användes kommer värdena att vara tre gånger olika.

Tillbaka till innehållsförteckningen

Orsaken till proteinet i urinen kan vara patologiska processer i njurarna:

• filtrering i renal glomeruli går fel väg;
• absorption i proteinrör är försämrad
• Vissa sjukdomar har en stark belastning på njurarna - när proteinet i blodet är förhöjt, har njurarna helt enkelt inte tid att filtrera det.

De övriga orsakerna anses vara icke-njure. Så här utvecklar funktionell albuminuri. Proteinet i urinanalysen framträder i allergiska reaktioner, epilepsi, hjärtsvikt, leukemi, förgiftning, myelom, kemoterapi, systemiska sjukdomar. Oftast kommer denna indikator i patientanalyser att vara den första klockan av hypertensiv sjukdom.

En ökning av urinprotein kan bero på icke-patologiska faktorer, så ytterligare analyser kommer att krävas. Gå tillbaka till innehållsförteckningen

Kvantitativa metoder för att bestämma protein i urinen ger fel, därför rekommenderas att utföra flera analyser och använd sedan formeln för att beräkna rätt värde. Urinproteininnehållet mäts i g / l eller mg / l. Dessa indikatorer på protein gör det möjligt att bestämma nivån av proteinuri, föreslå en orsak, utvärdera prognosen och bestämma strategin.

Tillbaka till innehållsförteckningen

För kroppens fulla funktion kräver en konstant utbyte mellan blod och vävnader. Det är endast möjligt om det finns ett visst osmotiskt tryck i blodkärlen. Blodplasmakroteiner upprätthåller bara en sådan nivå av tryck, när lågmolekylära ämnen lätt passerar från mediet med sin höga koncentration till mediet med den lägre koncentrationen. Förlusten av proteinmolekyler leder till frisättning av blod från sin säng till vävnaden, vilket är fyllt av starkt ödem. Detta är manifestationen av måttlig och svår proteinuri.

De initiala stadierna av albuminuri är asymptomatiska. Patienten uppmärksammar bara manifestationerna av den underliggande sjukdomen, vilket är orsaken till protein i urinen.

Spårproteinuri kallas en ökning av proteinhalten i urinen på grund av användningen av vissa produkter. Återgå till innehållsförteckningen

Urin för analys samlas i en ren, skummad behållare. Innan du visar på toaletten, måste du tvätta med tvål och vatten. Kvinnor rekommenderas att stänga vagina med en bit bomull eller en tampong så att vaginala urladdningen inte påverkar resultatet. På kvällen är det bättre att inte dricka alkohol, mineralvatten, kaffe, kryddigt, saltt och mat som ger urin en färg (blåbär, betor). Stark fysisk ansträngning, lång promenad, stress, feber och svettning, överdriven konsumtion av proteinföda eller droger innan urin väcker utseende av protein i urinanalysen av en helt frisk person. Detta tillåtna fenomen kallas spårproteinuri.

Tillbaka till innehållsförteckningen

Njursjukdom som leder till proteinförlust:

• Amyloidos. Normala celler i njurarna ersätts av amyloider (protein-sackaridkomplex), vilket förhindrar att kroppen fungerar normalt. Vid proteinuriskt stadium deponeras amyloider i njurvävnaden, som förstör nephronen och, som ett resultat, njurfiltret. Så proteinet kommer från blodet in i urinen. Det här steget kan vara längre än 10 år.
• Diabetisk nefropati. På grund av felaktig metabolism av kolhydrater och lipider förstörs blodkärl, glomeruli och tubuler i njurarna. Protein i urinen är det första tecknet på en förutsagd komplikation av diabetes.
• Sjukdomar av inflammatorisk genesis - nefrit. Vanligtvis påverkar lesionerna blodkärlen, glomeruli och pyelokalisala systemet, vilket stör störningen av filtreringssystemet.
• Glomerulonefrit är i de flesta fall av autoimmun natur. Patienten klagar över en minskning av mängden urin, smärta i ryggen och en ökning av trycket. För behandling av glomerulonefrit rekommenderas kost, behandling och läkemedelsterapi.
• Pyelonefrit. Under akut tid uppstår symptom på bakteriell infektion: frysningar, illamående, huvudvärk. Detta är en infektionssjukdom.
• Polycystisk njursjukdom.

I en hälsosam kropp kan proteinmolekyler (och de är ganska stora i storlek) inte passera genom njurens filtreringssystem. Därför bör protein i urinen inte vara. Denna indikator är densamma för både män och kvinnor. Om analysen indikerar proteinuri är det viktigt att konsultera en läkare av skäl. Specialisten kommer att uppskatta hur mycket proteinhalten är förhöjd, oavsett om det finns en samtidig patologi, hur man återställer kroppens normala funktion. Enligt statistiken har kvinnor högre risk för urogenital sjukdom än män.

Metodsprincipen baserad på koagulering av protein i urinen i närvaro av salpetersyra (eller 20% lösning av sulfosalicylsyra).

Arbete framsteg: till 5 droppar urin tillsätt 1-2 droppar salpetersyra (eller sulfosalicylsyra). I närvaro av protein i urinen framgår grumlighet.

Tabell. Detektion av patologiska komponenter i urinen.

Anmärkning: I närvaro av glukos och protein i den undersökta urinen bestäms deras kvantitativa innehåll.

Metodsprincipen: När protein interagerar med pyrogallolrött och natriummolybdat bildas ett färgat komplex, färgintensiteten, som är proportionell mot proteinkoncentrationen i provet.

reagens: Arbetsreagens - pyrogallol röd lösning i succinatbuffert, kalibreringsproteinlösning med en koncentration på 0,50 g / l

Proverna blandas, håll i 10 minuter. vid rumstemperatur (18-25 ° C). Mät den optiska densiteten hos försöks- (Dop) och kalibreringsprovet (Dk) mot kontrollprovet vid A = 598 (578-610) nm. Färgning är stabil i 1 timme.

beräkning: koncentrationen av protein i urinen (C) g / l beräknas med formeln:

var: Dop = Dk = C = g / l.

Normala värden: upp till 0,094 g / l, (0,141 g / dag)

Metodsprincipen: När D-glukos oxideras genom atmosfäriskt syre under verkan av glukosoxidas bildas en ekvimolär mängd väteperoxid. Under peroxidas verkan oxiderar väteperoxiden kromogena substrat (en blandning av fenol och 4 aminoantipirin - 4AAP) med bildandet av en färgad produkt. Färgens intensitet är proportionell mot glukosinnehållet.

Glukos + O2 + H2O glukonolakton + H2O2

2H2O2 + fenol + 4AAP färgad förening + 4H20

Arbete framsteg: 1 ml av arbetslösningen och 0,5 ml fosfatbuffert införs i två rör. 0,02 ml urin tillsätts till det första röret, och 0,02 ml av kalibratorn sättes till den andra (kalibrering, glukosstandardlösning, 10 mmol / 1). Proverna blandas, inkuberas i 15 minuter vid en temperatur av 37 ° C i en termostat och den optiska densiteten hos experimentella (Dop) och kalibrerings (Dk) prover mot arbetsreagenset mäts vid en våglängd av 500-546 nm.

Beräkning: C = Dop / Dk  10 mmol / l Dop = Dk =

Innehållet av glukos i daglig urin bestäms av mmol / dag genom att multiplicera resultatet erhållet med den uppsamlade volymen per dag.

Obs. När sockerhalten i urinen över 1% måste spädas.

För närvarande använder biokemiska laboratorier en enhetlig uttrycklig metod för att analysera urin för glukos genom att använda reaktivt glukostestglukosprov eller använda kombinerade testremsor för pH, protein, glukos, ketonkroppar och blod. Testremsor, nedsänkt i ett kärl med urin i 1 sekund. och jämföra färgen på skalan.

Bestämning av protein med pyrogallol röd indikator

Metodsprincipen baseras på fotometrisk mätning av den optiska densiteten hos en lösning av ett färgat komplex bildat genom interaktionen mellan proteinmolekyler med molekyler i det pyrogallol-röda färgämneskomplexet och natriummolybdat (Pyrogallol Red-Molybdate-komplex) i ett surt medium. Färgens intensitet i lösningen är proportionell mot proteininnehållet i det material som studeras. Närvaron av detergenter i reagenset ger en ekvivalent definition av proteiner av olika natur och struktur.

Reagens. 1) 1,5 mmol / 1 lösning av pyrogallolrött (PGA): 60 mg PGA löses i 100 ml metanol. Förvaras vid temperatur 0-5 ° С; 2) 50 mmol / 1 succinatbuffertlösning pH 2,5: 5,9 g bärnstenssyra (HOOC-CH2-CH2-COOH); 0,14 g av natriumoxalat (Na2C2O4), och 0,5 g natrium-bensoat (C6H5COONa) löstes i 900 ml destillerat vatten; 3) 10 mmol / l natriummolybdatkristallhydratlösning (Na2MoO4x2H2O): 240 mg natriummolybdat löses i 100 ml destillerat vatten; 4) Arbetsreagens: Till 900 ml succinatbuffertlösning tillsätt 40 ml av lösningen av PHC och 4 ml natriummolybdatlösning. Lösningens pH justeras till 2,5 med en 0,1 mol / l lösning av saltsyra (HCl) och dess volym justeras till 1 liter. Reagenset i denna form är färdigt att använda och är stabilt vid förvaring på en mörk plats och vid en temperatur av 2-25 ° C i 6 månader; 5) 0,5 g / 1 standard albuminlösning.

Förloppsförloppet. 0,05 ml av den studerade urinen introduceras i det första provröret, 0,05 ml standardlösning av albumin tillsätts till det andra provröret och 0,05 ml destillerat vatten till det tredje provröret (kontrollprov), därefter tillsättes 3 ml arbetsreagens till dessa provrör. Innehållet i rören blandas och efter 10 minuter fotometeras provet och standarden mot ett kontrollprov vid en våglängd av 596 nm i en kyvett med en optisk banlängd av 10 mm.

Beräkningen av proteinkoncentrationen i det analyserade urinprovet utförs enligt följande formel:

C = 0,5 × apr / ast,

där C är proteinkoncentrationen i det analyserade urinprovet, g / 1; Apr och ast - utrotning av det undersökta urinprovet och standardalbuminlösningen, g / l; 0,5 - koncentration av standard albuminlösning, g / l.

• Lösningens färg (färgkomplex) är stabil i en timme;
• direkt proportionell relation mellan koncentrationen av protein i provet och absorptionen av lösningen beror på typen av fotometer;
• När proteinhalten i urinen är över 3 g / l spädes provet med isotonisk natriumkloridlösning (9 g / l) och bestämningen upprepas. Graden av utspädning beaktas vid bestämning av proteinkoncentrationen.

• Bestämning av urinprotein
• Unified Sulfosalicylic Acid Trial
• Unified Brandberg - Roberts - Stolnikov Metoden
• Bestämning av mängden protein i urinen genom reaktion med sulfosalicylsyra
• Biuret-metod
• Detektion i urinen av Bens - Jones protein

Proteinuri är ett fenomen där protein detekteras i urinen, vilket indikerar möjligheten till njurskador, fungerar som en faktor vid utveckling av hjärtsjukdomar, blodkärl, lymfatiska kärl.

Detektion av protein i urinen indikerar inte alltid en sjukdom. Ett liknande fenomen är typiskt även för absolut friska människor, i vars urinprotein kan detekteras. Hypotermi, fysisk ansträngning, konsumtion av proteinfoder leder till utseendet av protein i urinen, som försvinner utan behandling.

Vid tidpunkten för screening bestämmer 17% av friska människor protein, men endast 2% av detta antal personer visar ett positivt testresultat som ett tecken på njursjukdom.

Proteinmolekyler ska inte komma in i blodet. De är viktiga för kroppen - de är ett byggmaterial för celler, deltar i reaktioner som koenzymer, hormoner, antikroppar. Hos både män och kvinnor är hastigheten den fullständiga frånvaron av protein i urinen.

Funktionen att förhindra förlust av proteinmolekyler av kroppen utförs av njurarna.

Två njursystem involveras i filtrering av urin:

1. glomeruli - släpp inte in stora molekyler, men håll inte albumin, globuliner - en liten del av proteinmolekylerna;
2. renal tubuli - adsorbproteiner filtrerade glomeruli, återvända till cirkulationssystemet.

I urin detekteras albuminer (ca 49%), mukoproteiner, globuliner, immunoglobuliner av vilka svarar för cirka 20%.

Globuliner - vassleproteiner med hög molekylvikt, som produceras i immunsystemet och levern. De flesta av dem syntetiseras av immunsystemet, avser immunoglobuliner eller antikroppar.

Albuminer är en bråkdel av proteiner som först uppträder i urinen även med mindre njurskador. Det finns en viss mängd albumin i frisk urin, men det är så obetydligt att det inte kan detekteras med hjälp av laboratoriediagnostik.

Det lägre tröskelvärdet som kan detekteras med hjälp av laboratoriediagnostik är 0,033 g / l. Om mer än 150 mg protein förloras per dag talar de om proteinuri.

Grundläggande urinprotein data

Sjukdomen med mild proteinuri är asymptomatisk. Visuellt kan proteinfri urin inte särskiljas från urin, där det finns en liten mängd protein. Något skumlikt urin blir redan med en hög grad av proteinuri.

Det är möjligt att anta en aktiv utsöndring av protein i urinen genom patientens utseende endast med en måttlig eller svår grad av sjukdomen på grund av utseende av ben i benen, ansiktet, buken.

I de tidiga skeden av sjukdomen kan följande vara indirekta tecken på proteinuri:

• urin missfärgning;
• ökande svaghet;
• brist på aptit;
• illamående, kräkningar;
• benvärk;
• sömnighet, yrsel
• förhöjd temperatur.

Utseendet på sådana tecken kan inte ignoreras, särskilt under graviditeten. Detta kan innebära en liten avvikelse från normen, och kan vara ett symptom på att utveckla preeklampsi, preeklampsi.

Att kvantifiera förlusten av protein är inte en lätt uppgift, för att uppnå en mer fullständig bild av patientens tillstånd används flera laboratorietester.

Svårigheter att välja en metod för att detektera överskott av protein i urinen förklaras av:

• lågproteinkoncentration, för vilken erkännande kräver hög precisioninstrument;
• sammansättning av urin, komplicerar uppgiften, eftersom den innehåller ämnen som snedvrider resultatet.

Den största informationen ges av analysen av den första morgondelen av urin, som samlas upp efter vakning.

På tröskeln till analysen måste följande villkor vara uppfyllda:

• Ät inte kryddig, stekt, proteinmat, alkohol;
• utesluta diuretikum i 48 timmar;
• begränsa fysisk aktivitet
• följ noggrant reglerna för personlig hygien.

Morgonurin är den mest informativa, eftersom den är långsiktig i blåsan, mindre beroende av matintag.

Mängden protein i urinen kan analyseras med slumpmässig del, vilken tas vid vilken som helst tidpunkt, men den här analysen är mindre informativ, desto högre är sannolikheten för fel.

För att kvantifiera daglig proteinförlust görs en analys av den totala dagliga urinen. För att göra detta, inom 24 timmar samlade i en speciell plastbehållare all urin allokerad för dagen. Du kan börja samla när som helst. Huvudförhållandet - exakt dagen för insamling.

Den kvalitativa definitionen av proteinuri är baserad på denaturering av proteinet med fysiska eller kemiska faktorer. Kvalitativa metoder avser screening, vilket gör det möjligt att fastställa närvaron av protein i urinen, utan att ge möjlighet att noggrant bedöma graden av proteinuri.

Använda prov:

• med kokande;
• sulfosalicylsyra;
• salpetersyra, reagens Larionic vid Heller-ringprovet.

Ett prov med sulfosalicylsyra utförs genom att jämföra ett kontrollurinprov med en erfaren, i vilken 7-8 droppar 20% sulfosalicylsyra sättes till urinen. Slutsatsen om närvaron av proteinet görs i enlighet med intensiteten hos den opaliserande turbiditeten som uppträder i provröret under reaktionen.

Mer vanligt Geller-test med 50% salpetersyra. Metodens känslighet är 0,033 g / 1. Med en sådan koncentration av proteinet in vitro med ett urinprov och ett reagens i 2-3 minuter efter start av experimentet visas vit filiform ring, bildandet av vilket indikerar närvaro av protein.

Semikvantitativa metoder innefattar:

• Metod för bestämning av protein i urintestremsor;
• Brandberg-Roberts-Stolnikov-metoden.

En metod för att bestämma den metod Brandberg-Roberts-Stolnikova baserat på ringformiga metod Geller, men kan mer exakt uppskatta mängden av protein. Vid utförande av ett test med denna teknik uppnår flera utspädningar av urin utseendet på en trådliknande proteinring under tidsintervallet 2-3 minuter från början av testet.

I praktiken används testremsa-metoden med det applicerade färgämnet bromfenolblått som en indikator. Nackdelen med testremsor är selektiv känslighet för albumin, vilket leder till en snedvridning av resultatet vid en ökning av urinkoncentrationen av globuliner eller andra proteiner.

Nackdelarna med förfarandet är också relativt låg känslighet för testet till proteinet. Testremsor börjar reagera på närvaron av protein i urinen vid en proteinkoncentration större än 0,15 g / 1.

Kvantitativa bedömningsmetoder kan delas upp villkorligt i:

Metoder är baserade på egenskaperna hos proteiner för att minska lösligheten under verkan av ett bindemedel med bildandet av en dåligt löslig förening.

Agenter som orsakar proteinbindning kan vara:

• sulfosalicylsyra;
• triklorättiksyra;
• bensetoniumklorid.

På resultaten av testen dras slutsatser utifrån graden av dämpning av ljusflödet i provet med suspension jämfört med kontrollen. Resultaten av denna metod kan inte alltid tillskrivas tillförlitlig på grund av skillnader i villkoren för: hastighet blandning av reaktanterna, temperatur, surhet för mediet.

Effekten på utvärdering av medicineringsintaget dagen innan, innan man utför test med dessa metoder, kan inte tas:

• antibiotika;
• sulfonamider;
• jodhaltiga läkemedel.

Metoden avser tillgänglig till kostnad, vilket gör att den kan användas i stor utsträckning för screening. Men mer exakta resultat kan erhållas med användning av dyrare kolorimetriska tekniker.

Känsliga metoder som exakt bestämmer koncentrationen av protein i urinen inkluderar kolorimetriska metoder.

Du kan göra det med hög precision:

• biuretreaktion;
• teknik Lowry;
• Färgtekniker som använder färgämnen som bildar komplex med urinproteiner som avviker från provet visuellt.

Colorimetriska metoder för att detektera protein i urinen

Metoden avser en pålitlig, mycket känslig, som tillåter att bestämma i urinalbuminet globuliner, paraproteiner. Den används som huvudmetod för att klargöra kontroversiella testresultat, såväl som det dagliga urinproteinet hos patienter med nefrologiska avdelningar på sjukhus.

Noggrannare resultat kan uppnås med Lowry-metoden, som baseras på biuretreaktionen, liksom Folinreaktionen, som igenkänner tryptofan och tyrosin i proteinmolekyler.

För att eliminera eventuella fel renas urinprovet genom dialys från aminosyror, urinsyra. Fel är möjliga vid användning av salicylater, tetracykliner, klorpromazin.

Den mest exakta metoden för att bestämma ett protein är baserat på dess egenskap att binda till de färgämnen som används:

• Ponceau;
• Coomassie briljantblå;
• pyrogallisk röd.

Under dagen varierar mängden protein som utsöndras i urinen. För att mer objektivt bedöma förlusten av protein i urinen, introducera begreppet dagligt protein i urinen. Detta värde mäts i g / dag.

För en snabb bedömning av det dagliga proteinet i urinen bestäms mängden protein och kreatinin i en enda del av urinen, sedan utvinns ett protein / kreatininförhållande från proteinförlusten per dag av förhållandet.

Metoden är baserad på det faktum att hastigheten av urin kreatinin utsöndring är konstant, förändras inte under dagen. I en frisk person är det normala förhållandet protein: kreatinin i urinen 0,2.

Denna metod eliminerar eventuella fel som kan uppstå vid insamling av daglig urin.

Kvalitativa tester oftare än kvantitativa tester ger falskt positiva eller falska negativa resultat. Fel uppstår i samband med medicinering, kostvanor, fysisk aktivitet på tröskeln till analysen.

Avkodningen av detta kvalitativa test ges genom visuell bedömning av grumlighet i provröret jämfört med testresultatet med kontrollen:

1. svag positiv reaktion uppskattas som +;
2. positiv ++;
3. starkt positiv +++.

Geller-ringprovet utvärderar närvaron av protein i urinen mer noggrant, men tillåter inte kvantifiering av proteinet i urinen. Liksom sulfosalicylsyraprovet ger Geller-testet bara en grov uppfattning om urinproteininnehållet.

Metoden gör det möjligt att bestämma graden av proteinuria kvantitativt, men för tidskrävande, felaktig, eftersom vid en stark utspädning minskar noggrannheten i bedömningen.

För att beräkna proteinet måste du multiplicera graden av utspädning av urin med 0, 033 g / l:

Testet kräver inga speciella villkor, det här är enkelt att göra hemma. För att göra detta måste du sänka testremsan i urinen i 2 minuter.

Resultaten kommer att uttryckas med antalet plusser på remsan, avkodningen av vilken finns i tabellen:

1. Testresultat motsvarande värden på upp till 30 mg / 100 ml motsvarar fysiologisk proteinuri.
2. Värdena på testremsor 1+ och 2 ++ betyder signifikant proteinuri.
3. Värdena på 3 +++, 4 ++++ är markerade med patologisk proteinuri orsakad av njursjukdomar.

Testremsor kan bara ungefär bestämma det ökade proteinet i urinen. De används inte för korrekt diagnostik, och ännu mer kan de inte säga vad det betyder.

Låt inte testremsor ge tillräcklig bedömning av mängden protein i urinen hos gravida kvinnor. En mer tillförlitlig metod för bedömning är bestämning av protein i daglig urin.

Bestämning av urinprotein med hjälp av testremsor:

Dagligt protein i urinen är en mer noggrann diagnos av bedömningen av njurarnas funktionella tillstånd. För detta behöver du samla all urin som utsöndras av njurarna per dag.

Proteininnehållet i urinen kan hittas genom förhållandet protein: kreatinin, data visas i tabellen:

Giltiga värden för protein / kreatininförhållandet är data i tabellen:

Med förlusten av mer än 3,5 g protein per dag kallas tillståndet massivt proteinuri.

Om det finns mycket protein i urinen krävs en omprövning efter 1 månad, därefter efter 3 månader, enligt resultaten, vilket visar varför normen överskrids.

Orsaker till ökat protein i urinen är den ökade produktionen i kroppen och kränkning av njurarna, urskilja proteinuri:

• fysiologiska - mindre avvikelser från normen orsakas av fysiologiska processer, lösas spontant;
• patologiska - förändringar orsakas som ett resultat av den patologiska processen i njurarna eller andra organ i kroppen, utan behandling fortskrider.

En liten ökning av proteinet kan observeras med riklig protein näring, mekaniska brännskador, skador, åtföljd av ökad produktion av immunglobuliner.

En mild proteinuria kan orsakas av fysisk ansträngning, psyko-emotionell stress eller att ta vissa mediciner.

Den fysiologiska proteinuri är en ökning av urinproteinet hos barn under de första dagarna efter födseln. Men efter en veckas liv anses proteinhalten i barnets urin som en avvikelse från normen och indikerar en utvecklande patologi.

Njursjukdomar, infektionssjukdomar åtföljs också ibland av utseendet av protein i urinen.

Sådana tillstånd motsvarar vanligen en mild grad av proteinuri, transienta fenomen, överlämnar sig snabbt, utan att behöva särskild behandling.

Mer allvarliga tillstånd, allvarlig proteinuri noteras i fallet med:

• glomerulonefrit;
• diabetes;
• hjärtsjukdomar;
• blåscancer;
• multipelt myelom;
• infektion, läkemedelsskada, polycystisk njursjukdom;
• högt blodtryck;
• systemisk lupus erythematosus;
• Goodpasturesyndrom.

Tarmobstruktion, hjärtsvikt och hypertyreoidism kan orsaka spår av protein i urinen.

Varianter av proteinuri klassificeras på flera sätt. För en kvalitativ bedömning av proteiner kan man använda Yaroshevsky-klassificeringen.

Enligt systematiken för Yaroshevsky, skapad 1971, utmärks proteinuria:

1. renal - vilket inkluderar brott mot glomerulär filtrering, frisättning av tubulärprotein, bristen på readsorption av proteiner i tubulerna;
2. prerenal - förekommer utanför njurarna, utsöndring av hemoglobin, proteiner som förekommer i överskott i blodet som ett resultat av multipel myelom;
3. Postrenal - inträffar vid urinvägarna efter njurarna, utsöndring av protein vid förstöring av urinorganen.

För en kvantitativ bedömning av vad som händer isoleras proteiner från proteinerna. Man måste komma ihåg att de lätt kan gå in i en tyngre utan behandling.

Det mest allvarliga stadium av proteinuri utvecklas med förlusten av mer än 3 g protein per dag. Förlusten av protein från 30 mg till 300 mg per dag motsvarar det måttliga skedet eller mikroalbumuri. Upp till 30 mg protein i daglig urin betyder en mild proteinuri.

Protein norm i urinen hur mycket?

Normalt protein i urinen är praktiskt taget frånvarande (mindre än 0,002 g / l). Under vissa förhållanden kan emellertid en liten mängd protein förekomma i urinen hos friska individer efter intag av en stor mängd proteinmat, till följd av kylning, emotionsstress, långvarig fysisk ansträngning (den så kallade marschande proteinurien).

Utseendet av en signifikant mängd protein i urinen (proteinuri) är en patologi. Orsaken till proteinuri kan vara njursjukdom (akut och kronisk glomerulonefrit, pyelonefrit, gravid nefropati, etc.) eller urinvägs (inflammation i blåsan, prostata, urinrör). Renalproteuri kan vara organisk (glomerulär, tubulär och överskott) och funktionell (febrilproteuri, ortostatisk hos ungdomar, när överfödda spädbarn, hos nyfödda). Funktionell proteinuri är inte associerad med njurpatologi. Den dagliga mängden protein varierar hos patienter från 0,1 till 3,0 g eller mer. Sammansättningen av urinproteiner bestäms av elektrofores. Utseendet i urinen av Bens-Jones-proteinet är karakteristiskt för myelom och Waldenstrom-makroglobulinemi, # 223; 2 mikroglobuliner vid skador på njurtubulerna.

Normalt protein i urinen är praktiskt taget frånvarande (mindre än 0,002 g / l).

De huvudsakliga tecknen på sjukdom som upptäckts vid urinstudier.

SG Specifik vikt. En minskning av den specifika vikten indikerar en minskning av njurernas förmåga att koncentrera urin och utsöndra toxiner från kroppen, vilket är fallet med njursvikt. Ökningen i specifik vikt är förknippad med en stor mängd socker i urinen, salter. Det bör noteras att det är omöjligt att utvärdera den specifika gravitationen för endast ett urintest, det kan vara slumpmässiga förändringar, det är nödvändigt att upprepa urinanalysen 1-2 gånger.

Proteinprotein i urinen - proteinuri. Orsaken till proteinuri kan vara skada på njurarna själva i nefrit, amyloidos och skador genom gifter. Protein i urinen kan också uppstå på grund av urinvägssjukdomar (pyelonefrit, cystit, prostatit).

Glukosglukos (socker) i urinen - glykosuri - oftast på grund av diabetes. En sällsynt orsak är nederlaget hos njurtubulerna. Det är mycket störande om ketonkroppar detekteras tillsammans med socker i urinen. Detta händer med svår, felaktig diabetes och är en harbinger av de mest allvarliga komplikationerna hos diabetes - diabetisk koma.

Bilirubin, Urobilinogen Bilirubin och urobilin bestäms i urinen i olika former av gulsot.

Erytrocyter Erytrocyter i urin - hematuri. Detta händer antingen med njurarnas nederlag, oftast med inflammation, eller hos patienter med urinvägsjukdomar. Om till exempel en sten rör sig längs dem kan den skada slemhinnan, det kommer röda blodkroppar i urinen. En förfallande njurtumör kan också leda till hematuri.

Leukocyter Leukocyter i urinen - leukocyturi, oftast resultatet av inflammatoriska förändringar i urinvägarna hos patienter med pyelonefrit, cystit. Leukocyter bestäms ofta av inflammation hos de kvinnliga yttre könsorganen, hos män, genom inflammation i prostatakörteln.

Cylindrs Cylinders är märkliga mikroskopiska strukturer. Hyalinflaskor i en mängd av 1-2 kan vara i en frisk person. De bildas i njurröret, det fastnar ihop proteinpartiklar. Men ökningen i deras antal, cylindrar av andra slag (granulär, erytrocyt, fett) indikerar alltid skadorna på njurevävnaden i sig. Det finns cylindrar i inflammatoriska sjukdomar i njurarna, metaboliska skador, som diabetes.

Informativ metod och dess gränser. Informationsinnehållet i det allmänna urintestet för erkännande av specifika sjukdomar i njurarna är lågt, vanligtvis kräver ytterligare, mer noggranna studier. Men forskning är väldigt viktig, särskilt när man utför förebyggande studier, eftersom det gör det möjligt att identifiera tidiga tecken på njursjukdom. Det är också känt att ofta njursjukdom uppträder gömd, och endast urinstudien tillåter dem att misstänka och genomföra ytterligare nödvändig undersökning.

I de flesta laboratorier, när du undersöker urin för protein, använd först kvalitativa reaktioner som inte upptäcker protein i en frisk persons urin. Om proteinet i urinen detekteras med kvalitativa reaktioner utförs kvantitativ (eller halvkvantitativ) bestämning. Samtidigt är funktionerna i de använda metoderna som täcker ett annat spektrum av uroproteiner viktiga. Vid bestämning av protein med användning av 3% sulfosalicylsyra anses således proteinet vara normalt upp till 0,03 g / 1, under användning av pyrogallolmetoden ökar gränsen för normala proteinvärden till 0,1 g / 1. I detta avseende är det nödvändigt att ange proteins normala värde för analysmetoden som används av laboratoriet.

Vid bestämning av minsta mängder protein rekommenderas att upprepa analysen. Vid tvivel bör den dagliga förlusten av protein i urinen bestämmas. Normal daglig urin innehåller protein i små mängder. Under fysiologiska förhållanden varieras det filtrerade proteinet nästan helt av epitel av proximal tubuler och dess innehåll i den dagliga mängden urin varierar beroende på olika författare från spår upp till 20 50, 80 100 mg och till och med upp till 150 200 mg. Vissa författare tror att den dagliga utsöndringen av protein i mängden 30 50 mg / dag är den fysiologiska normen för en vuxen. Andra anser att utsöndring av urinprotein inte får överstiga 60 mg / m2 kroppsytor per dag, med undantag för den första månadens liv då värdet av fysiologisk proteinuri kan vara fyra gånger högre än de angivna värdena.

Det allmänna tillståndet för utseendet av proteiner i en frisk persons urin är deras ganska höga koncentration i blodet och molekylvikten på inte mer än 100 200 kDa.

Det här är inte normen, med din diagnos är det möjligt, en annan sak är att för nefrotiskt syndrom är det faktiskt en liten indikator.. titta på kliniken - svullnad, tryck etc. fortsätt att ta den föreskrivna behandlingen..

och ändå säger jag: det är normalt att inte vara!